Същност на ДНК анализа чрез PCR и Видове методи за доказване на полиморфизми

Същност на ДНК анализа чрез PCR и Видове методи
за доказване на полиморфизми по нуклеотидната
последователност на ДНК; PCR и RT-PCR за
диагностика на вируси, бактерии и паразити.

Specific Enzymatic Amplification of DNA
In Vitro: The Polymerase Chain Reaction
K. Mullis, F. Faloona, S. Scharf, R. Saiki, G.
Horn, and H. Erlich; 1986

GeneAmp 9700
Тип блок-алуминиев,
взаимозаменяемост
96 проби за 0,2ml епрув./плаки
2x384 проби, за 0.02 ml плаки
Температуна област: 4.0°С – 99.9
°С, Peltier система
Нагряващ се капак
Автоматичен “Hot start”
Допълнителни настройки
Висока специфичност
Голяма чувствителност
Бързина
Лесна за автоматизиране
Широка област на
приложение
Апарат за PCR- Polymerase Chain Reaction-
полимеразно верижна реакция
PCR е техника отличаваща се с:

Термична денатурация (denaturation) на двойно-
верижната ДНК при 94С до пълно разделяне на
веригите
Хибридизация (annealing) между праймерите и
комплементарните им секвенции от матричната ДНК.
Температурата на това взаимодействие е строго
специфична и зависи от базовия състав и дължината
на праймерите. Т = 2˚ С (n A/T) + 4˚ С (n G/C)
Синтез в посока 53 (extension) на ДНК веригата
комплементарна на матрицата. Температурата на този
етап се определя от използвания ензим така, че да му
се осигури най-висока ДНК-полимеразна активност.
(За Taq DNA Polymerase тя е 72C).
PCR представлява многократно повтаряне на серия от
цикли, всеки от които включва три стъпки: